Proliferação in vitro de fibroblastos oriundos de feridas de diabéticos / In vitro proliferation of fibroblast obtained from diabetic wounds

Introdução: A presença de úlceras em membros inferiores é uma das graves complicações do diabetes melito. Cerca de 15% dos diabéticos estão propensos a desenvolver úlcera de membros inferiores, o que pode levar a amputações desses membros. Úlceras nos diabéticos são de difícil cura, em decorrência de anormalidades celulares e moleculares existentes no tecido de granulação dessas feridas. Tais fibroblastos podem apresentar dificuldades de proliferação in vitro, explicando os achados clínicos de cronicidade ferida. Neste estudo pretendemos comparar a proliferação celular in vitro de fibroblastos derivados de úlceras diabéticas com fibroblastos não diabéticos oriundos de pele normal. Método: Fibroblastos foram isolados a partir de amostras de tecido de granulação de cinco indivíduos portadores de úlceras diabéticas e comparados a fibroblastos obtidos amostras de pele íntegra de cinco indivíduos não-diabéticos. As células foram cultivadas em monocamadas durante 27 dias e sua capacidade proliferativa foi analisada em intervalos de 3-4 dias. Resultados: Foi observado que fibroblastos originados de úlceras diabéticas apresentaram proliferação reduzida após 27 dias de cultura celular, quando comparado aos fibroblastos oriundos de pele normal (controle), mas essa diferença não foi estatisticamente significativa (p=0,113). Conclusão: Apesar de não haver diferenças matemáticas entre as proliferações de fibroblastos de ambas as origens, diferenças fisiológicas e morfológicas foram observadas no comportamento das células estudadas.

Introduction: Lower extremity ulceration is one of the serious diabetic complications. About 15% of diabetic patients are supposed to develop lower limb ulceration what may lead to amputations. Ulcers associated with diabetes are recalcitrant to healing due to cellular and molecular abnormalities, present in this pathology. It has been described behavioral changes in fibroblasts which are responsible for the granulation tissue formation. Under experimental conditions those fibroblasts can present difficulties to proliferate, explaining the clinical findings of wound chronicity. Our purpose in this study was to investigate the fibroblasts from diabetic patients in cell cultures, comparing with non-diabetic skin fibroblasts. Methods:Cells were taken and isolated from five diabetic ulcers granulation tissue andcompared to those taken from five non-scarred non-diabetic skin samples. Cells were grown in monolayers during 27 days and their proliferative capacity was analyzed at 3 to 4 days intervals. Results: Fibroblasts from diabetic ulcers presented reduced proliferation after 27 days of cell culture when compared to fibroblasts from normal skin (control),but this difference was not statistically significant (p=0.113). Conclusion: Despite no mathematical differences were observed between the proliferations of fibroblast from both origins, physiologic and morphologic differences were seen in the cell behavior.

Úlceras nos membros inferiores de pacientes diabéticos: mecanismos moleculares e celulares / Lower limb ulcers in diabetic patients: molecular and cellular mechanisms

Diabetes mellitus representa um grupo de desordens metabólicas heterogêneas que surge como resultado de hiperglicemia por déficit na secreção e/ou ação da insulina. Sua prevalência e gastos relacionados vêm crescendo no mundo todo. Entre suas complicações de longo prazo, a que mais gera admissões hospitalares é a úlcera de membros inferiores. Estas feridas frequentemente tornam-se crônicas devido a uma série de aberrações moleculares e celulares do processo de cicatrização, sendo as principais: alta concentração de metaloproteinases(MMPs), neuropatia, alta probabilidade de infecção e resposta inflamatória não fisiológica, estresse oxidativo, formação excessiva de AGEs (produtos de glicoxidação avançada), neoangiogênese deficiente, desbalanço entre metabolismo e entrega de nutrientes, concentrações inadequadas de fatores de crescimento e reguladores de expressão gênica, e anormalidades celulares. Com melhor compreensão científica desses eventos e da cicatrização fisiológica, novas abordagens da patologia poderão fornecer resultados mais satisfatórios ao seu tratamento.

Diabetes depictures a heterogeneous group of metabolic disorders that arise as a result of hyperglycemia due to the deficit of secretion and/or insulin action. Its prevalence and related costs have been growing around the world. Among its long-term complications, foot ulcer is the one that generates morehospital admissions. These wounds often become chronic due to a series of molecular and cellular aberrations of the healing process, being the main mechanisms the following: high concentrations of matrix metalloproteinases (MMPs), neuropathy, high probability ofinfection and non-physiological inflammatory response, oxidativestress, excessive formation of AGEs (advanced glicoxidation end-products), deficient neoangiogenesis, imbalance between metabolism and nutrient delivery, inadequate concentrationsof growth factors and gene expression regulators, and cellular abnormalities. With better scientific understanding of these events and physiological healing, new approaches to disease can providemore satisfactory results to the treatment.

Papel da inibição da ciclooxigenase-2 na nefrotoxicidade induzida pelagentamicina e antiinflamatórios não-hormonais em ratos

A gentamicina é um das drogas antimicrobianas mais nefrotóxicas. O uso freqüente de antiinflamatórios não-hormonais (AINH), tais como a indometacina, faz com que a sua associação com a gentamicina também não seja rara. Isso cria um risco adicional de insuficiência renal aguda, como se sabe a gentamicina induz a vasoconstrição renal, a qual é limitada pelo incremento compensatório da produção renal de prostaglandinas. A isoforma 1 da ciclooxigenase (COX-1) é a principal responsável pela síntese de prostaglandinas vasodilatatoras, ao passo que a isoforma 2 (COX-2) participa predominantemente de processos inflamatórios. Ambas são inibidas pelos AINH. Espera-se que os inibidores seletivos da COX-2, tais como rofecoxibe, possam ser uma classe alternativa de drogas que permita reduzir a nefrotoxicidade dos AINH. O objetivo deste estudo é comparar o efeito da associação de gentamicina com os clássicos AINH ou com os inibidores seletivos da COX-2. Ratos machos Wistar foram tratados por cinco dias com solução salina (0,1 ml, intraperitoneal (i.p.)), gentamicina (100 mg/kg, i.p.), indometacina (5 mg/kg, via oral (v.o.)), rofecoxibe (1,4 mg/kg, v.o.), gentamicina + indometacina ou gentamicina + rofecoxibe (nas mesmas doses e vias de administração previamente descritas). Os ratos que haviam recebido gentamicina desenvolveram uma redução significante do clearance de creatinina e um aumento significante da excreção urinária da enzima alfa-glutationa-S-transferase, um marcador de lesão de túbulo proximal, quando comparados aos ratos que não a haviam recebido. Não houve diferença nos níveis urinários de alfa-GST entre os três grupos que haviam recebido gentamicina. Ratos que receberam gentamicina + indometacina desenvolveram uma redução adicional do clearance de creatinina quando comparados com aqueles que receberam gentamicina exclusivamente....

Interferência do intervalo de administração da droga sobre a nefrotoxicidade da gentamicina em ratos / Influence of the dose regimen on the gentamicin nephrotoxicity in rats

A insuficiência renal aguda (IRA) que apresenta índice de mortalidade em torno de 50 por cento, pode ser definida como um abrupto declínio da filtração glomerular, resultante de isquemia ou toxicidade. A nefrotoxicidade por drogas é uma das etiologias mais freqüentes (27 por cento) e sugere-se que o intervalo de administração da droga pode interferir neste efeito colateral, entretanto o melhor regime de administração ainda não está bem estabelecido. Este conhecimento proporcionaria uma atuação mais direcionada de enfermagem na prevenção desta IRA hospitalar. Os resultados obtidos nesta pesquisa, indicam que a infusão única de gentamicina determina menor nefrotoxicidade, provavelmente devido à redução da sua concentração plasmática nas 24hs, diminuindo o acúmulo intracelular deste fármaco, um dos principais mecanismos celulares deste tipo de lesão. Este regime de tratamento mostra portanto vantagens quanto ao custo, efeito nefrotóxico e segurança quanto à eficácia terapêutica.

The acute renal failure (ARF), that still presents a righ mortality rate (50 percent) can be defined as an abrupt decline of the glomerular filtration, resultant of isquemic or toxicity event. The drugs nephrotoxicity is one of the most frequent cause (27 percent) of ARF and it is suggested that the interval of administration of the drug can interfere in this side effect, however the best administration regimen is not very well established. This study evaluated the renal function of rats that received gentamicin (100mg/kg) in one dose or in two doses (2x 50mg/kg),by intraperitoneal infusion. The results obtained in this research, indicated that the single infusion of gentamicin determined smaller nephrotoxicity by the reduction of serum concentration of this drug in 24 hours, decreasing the intracelular accumulation of this gentamicin, which is one of the main cellular mechanisms of this renal injury. The single dose treatment regime, otherwise, showes advantages not only related to the nephrotoxicity effect, but also it is relevant to the cost and safety, which can be rationable factors in the administration of this drug.

Papel da inibição da ciclooxigenase-2 na nefrotoxicidade induzida pela gentamicina e antiinflamatórios não-hormonais em ratos / Role of cyclooxygenase-2 inhibition in gentamicin-induced nephrotoxicity and nonsteroidal anti-inflammatory drugs in rats

A gentamicina é um das drogas antimicrobianas mais nefrotóxicas. O uso freqüente de antiinflamatórios não-hormonais (AINH), tais como a indometacina, faz com que a sua associação com a gentamicina também não seja rara. Isso cria um risco adicional de insuficiência renal aguda, como se sabe a gentamicina induz a vasoconstrição renal, a qual é limitada pelo incremento compensatório da produção renal de prostaglandinas. A isoforma 1 da ciclooxigenase (COX-1) é a principal responsável pela síntese de prostaglandinas vasodilatadoras, ao passo que a isoforma (COX-2) participa predominantemente de processos inflamatórios. Ambas são inibidas pelos AINH. Espera-se que os inibidores seletivos da COX-2, tais como rofecoxibe, possam ser uma classe alternativa de drogas que permita reduzir a nefrotoxicidade dos AINH. O objetivo deste estudo é comparar o efeito da associação de gentamicina com os clássicos AINH ou com inibidores da COX-2. Ratos machos Wistar foram tratados por cinco dias com solução salina (0,1 ml, intraperitoneal (i.p.)), gentamicina (100 mg/kg, i.p.), indometacina (5 mg/kg, via oral (v.o.)), rofecoxibe (1,4 mg/kg, v.o.), gentamicina 'mais' indometacina ou gentamicina 'mais' rofecoxibe (nas mesmas doses e vias de administração previamente descritas). Os ratos que haviam recebido gentamicina desenvolveram uma redução significante do clearance de creatinina e um aumento significante da excreção urinária da enzima alfa-glutationa-S-transferase, um marcador de lesão de túbulo proximal, quando comparados aos ratos que não a haviam recebido. Não houve diferença nos níveis urinários de alfa-GST entre os três grupos que haviam recebido gentamicina. Ratos que receberam gentamicina 'mais' indometacina desenvolveram uma redução adicional do clearance de creatinina quando comparados com aquele que receberam gentamicina exclusivamente. Os efeitos destes tratamentos em relação ao clearance não foram estatisticamente ) significantes daqueles tratados com gentamicina 'mais' rofecoxibe, o que aponta que novos estudos sejam necessários para verificar se o rofecoxibe apresenta vantagens precisas sobre os AINH.

Gentamicin is one of the most nephrotoxic agents among antimicrobial drugs. The frequent use of nosteroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs), such as indometacin, in association with gentamicin is not so rare. This poses an additional risk of nephrotoxic acute renal failure, as gentamicin is known to induce renal vasoconstriction, which is limited by a compensatory increase by the renal production of prostaglandins. Isoform 1 of cyclooxygenase (COX-1) is the main responsible for the synthesis of renal vasodilators prostaglandins, while isoform 2 (COX-2) takes part predominantly in the inflammatory process. Both are inhibited by NSAIDs. The selective COX-2 inhibitors, as rofecoxib, are meant to be alternative drugs to relief the nephrotoxicity by NSAIDs. The objective of this study is to compare the effect of the association of gentamicin with classical NSAIDs and with the selective COX-2 inhibitors. Male Wistar rats were treated for 5 days with saline solution (0,1 ml, intraperitoneal (i.p.)), gentamicin (100 mg/kg, i.p.), indometacin (5 mg/kg, per oral (p.o.)), rofecoxib (1,4 mg/k, p.o.), gentamicin + indometacin or gentamicin + rofecoxib (in the same way and doses previusly given). We have found that rats that had received gentamicin developed significant reduction of the renal creatinine clearance and significant increase in the urinary excretion of alpha-glutathione-S-transferase (alpha-GST), a marker of proximal tubular lesion, when compared with the rats had not received gentamicin. There was no difference in the urinary level of alpha-GST among the three groups that had received gentamicin. Rats that received gentamicin + indometacin developed an additional reduction of the creatinine clearance when compared to those, that had received gentamicin alone. The effect of these treatments on the clearance failed to be statistically different from the effect of the treatment with gentamicin + rofecoxib, which means that additional studies are necessary to verify if presents definite advantages over NSAIDs.